中國水產(chǎn)門戶網(wǎng)報道本品系用恩諾沙星（ENR）偶聯(lián)蛋白的抗原、恩諾沙星單克隆抗體和酶標記羊抗鼠及其它試劑制成。用于定量、定性檢測雞組織、蝦、魚和雞血清中ENR殘留量。
【物理性狀】試劑盒外觀完整，內(nèi)裝試劑齊全。包被抗原的酶聯(lián)板透明干燥且用真空包裝，恩諾沙星（ENR）抗體工作液、底物液、終止液、標準品、濃縮洗滌液為透明液體，酶標記物為淺黃色溶液，試劑無菌檢驗均應(yīng)合格。
【靈敏度測定】  取已包被好的酶標板12孔，每兩孔分別加入0µg/L、0.5µg/L、1.5µg/L、4.5µg/L、13.5µg/L、40.5µg/L標準溶液各50µL，再加入ENR抗體50µL，37℃反應(yīng)30min，取出洗板5次，拍干，加入100µL酶標二抗，37℃反應(yīng)30min，取出洗板5次，拍干。加入底物液各50µL，避光37℃反應(yīng)15min，用50µL/孔終止液終止反應(yīng)，置450nm波長處測定吸光度值。每一濃度標準溶液吸光度值（B）平均值除以第一個標準（0標準）吸光度值（B0）的平均值再乘以100，即百分吸光度值。以ENR濃度（µg/L）的自然對數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線圖。
IC50（即0濃度標準溶液的吸光度值50％處所對應(yīng)的ENR濃度）范圍應(yīng)在1.45µg/L ~3.26µg/L之間。
【特異性測定】  取已包被好的酶標板18孔，每兩孔分別加入0µg/L、0.5µg/L、1.5µg/L、4.5µg/L、13.5µg/L、40.5µg/L標準溶液和陰性雞肉樣本提取液、10µg/kg和20µg/kg 兩個濃度ENR標準品添加的陽性雞肉樣本提取液各50µL，再加入ENR抗體50µL，37℃反應(yīng)30min，取出洗板5次，拍干，加入100µL酶標二抗，37℃反應(yīng)30min，取出洗板5次，拍干。加入底物液各50µL，避光37℃反應(yīng)15min，用50µL終止液終止反應(yīng)，置450nm波長處測定吸光度值。每一濃度標準溶液吸光度值（B）平均值除以第一個標準（0標準）吸光度值（B0）的平均值再乘以100%，即百分吸光度值。以ENR濃度（µg/L）的自然對數(shù)為X軸，百分吸光度為Y軸，繪制標準曲線圖。從標準曲線中查出陰性樣品和10µg/kg和20µg/kg 兩個濃度ENR添加的組織樣品的測定濃度。
陰性樣品測定值均應(yīng)在2.5µg/kg以下，10µg/kg和20µg/kg 兩個濃度ENR添加樣本回收率應(yīng)在60%~110%之間。
【精密度測定】  取已包被好的酶標板32孔，每兩孔分別加入0µg/L、0.5µg/L、1.5µg/L、4.5µg/L、13.5µg/L、40.5µg/L標準溶液50µL，其它20孔加入4.5µg/L的標準溶液50µL，再加入ENR抗體50µL，37℃反應(yīng)30min，取出洗板5次，拍干，加入100µL酶標二抗，37℃反應(yīng)30min，取出洗板5次，拍干。加入底物液各50µL，避光37℃反應(yīng)15min，用50µL終止液終止反應(yīng)，置450nm波長處測定吸光度值。
20個微孔的4.5µg/L標準溶液的吸光度值的變異系數(shù)（%）應(yīng)≤25%（n=20）。
【適用范圍】用于定量、定性檢測雞組織（肌肉、肝臟等）、蝦、魚和雞血清中ENR殘留量。
【用法和結(jié)果判定】
1.  溶液的配制
1.1  0.1MNaOH溶液     0.4g      NaOH
            去離水100ml溶解
1.2  乙腈NaOH溶液   將乙氰與0.1M NaOH溶液按84：16的體積比混合
1.3  PB緩沖液配制      0.52g   Na2HPO4·12H2O
                           0.088g   NaH2PO4·2H2O 
                           去離水100ml溶解
1.4 稀釋洗滌液  將20X濃縮洗滌液搖勻，用去離子水以1：20的比例稀釋，臨用前配制。
2.   樣品前處理
2.1   雞組織（肌肉、肝臟等）樣本處理方法
2.1.1 稱取2.0g均質(zhì)過的雞肉樣本于50mL離心管中。
2.1.2  加入乙腈 NaOH溶液10mL，充分混合10min，3000g以上，15℃離心10min。
2.1.3  取出5mL上清液，加入0.02M PB緩沖液2mL，混合均勻。
2.1.4  加入二氯甲烷5mL，充分混勻10min，3000g以上，15℃離心10min。去上層，取下層有機相到干燥瓶中（清亮無雜質(zhì)），50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干或氮氣吹干。
2.1.5  用0.6mL 0.02M PB緩沖液溶解干燥的殘留物，加入正己烷1mL，混合2min，3000g, 15℃離心5min。
2.1.6  輕吸掉上層有機相和中間部份液體，取下層50μL溶液，再加入150μL 0.02M PB緩沖液混勻即可分析。
2.2  雞血清樣本處理方法
2.2.1  用加有肝素鈉（20~30單位/mL血）的離心管采集血樣本，血樣本室溫靜置1h，待析出血清后3000g，15℃離心10min，取出血清1mL。
2.2.2  加入3mL乙腈充分上下混合10min，3000g以上，15℃離心10min。轉(zhuǎn)移上清至另一離心管中，加入1mL 0.02M PB緩沖液，混勻。
2.2.3  加入二氯甲烷4mL，充分混勻10min，3000g, 15℃離心10min。去上層，取下層有機相到干燥瓶中（清亮無雜質(zhì)），50℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干或氮氣吹干。
2.2.4用0.6mL 0.02M PB緩沖液溶解干燥的殘留物，加入正己烷1mL混合2min，取出3000g以上，15℃離心5min。
2.2.5  輕吸掉上層有機相和中間白色雜質(zhì)，取下層50μL溶液，再加入150μL PB緩沖液混勻即可分析。
2.3  水產(chǎn)品樣本的處理等同于雞組織樣本的處理方法
注：水產(chǎn)品提取中上述第1.2.5步，如果在兩相之間出現(xiàn)太多的泡沫或膠狀物，難以取出足夠的下層提取液，應(yīng)將樣品瓶放在80℃水浴中5min后再離心。
3.   檢測步驟
3.1  將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20~24℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
3.2  按需要取好微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2~8℃，不要冷凍。
3.3  編號：將樣品和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣品和標準品均需做2孔。
3.4  加標準品或樣本 50 mL /孔，然后加抗體工作液50 μL/孔，用蓋板膜蓋板，37℃水浴或恒溫箱反應(yīng)30min。
3.5  取出用洗滌液按每孔250μL，洗板4~5次，每次浸泡10秒，拍干。
3.6  加酶標記物工作液，每孔100mL，用蓋板膜蓋板后置37℃水浴或恒溫箱反應(yīng)30min。取出用洗滌液按每孔250μL，洗板4~5次，每次浸泡10秒，拍干。
3.7  顯色：每孔加入底物液A液50mL，再加B液50mL，輕輕振蕩混勻，37℃水浴或恒溫箱避光顯色15min。
3.8  測定：每孔加入2M終止液50mL，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測），測定吸光度值（OD值）。
4.   結(jié)果判定
所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個標準（0標準）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
百分吸光度值（%）＝B×100%
B0

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L標準溶液的平均吸光度值
以標準品百分吸光率為縱坐標，以恩諾沙星標準品濃度（µg/L）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中恩諾沙星實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣品的準確、快速分析。
【貯藏條件和保存期】
試劑盒應(yīng)在2~8℃保存，保存期為6個月。
【規(guī)格】  每個試劑盒含96孔板一塊，ENR標準品6瓶 1mL/瓶（0µg/L、0.5µg/L、1.5µg/L、4.5µg/L、13.5µg/L、40.5µg/L），ENR抗體工作液1瓶，7mL；酶標二抗工作液1瓶，12mL；濃縮洗滌液1瓶，40mL；底物液7mL各一瓶；終止液1瓶，7mL/瓶；蓋板膜1張，自封袋1個；說明書1份；質(zhì)量報告1份。
【注意事項】
1、劑盒在緩沖液配制和液體分裝上要做到無菌，防止試劑變質(zhì)。
2、試劑盒標準品應(yīng)經(jīng)過嚴格配制后方可用于試劑盒中。
3、添加回收用的高濃度標準品需經(jīng)過試劑盒自身標準驗證，合格后方可用于特異性和準確度監(jiān)控用。
4、嚴格按照質(zhì)量標準所述用法和結(jié)果判定內(nèi)容進行試劑盒質(zhì)量控制。
5、在試劑盒老化實驗中出現(xiàn)有不合格現(xiàn)象，則視該批試劑盒為不合格。