我國目前普遍采用夏苗培育法進行海帶苗培育,其具有兩大缺點:①育苗時間長、成本高、風險大。②由于育苗時混采、混育,易造成品種優良性狀退化。目前一些海帶育苗場開始采用無性繁殖系育苗技術,即利用海帶配子體克隆進行海帶苗培育,育苗50~60天幼苗即可出庫下海,不僅節約近一半育苗成本,并且可保持海帶良種性狀不退化,產量高。現將育苗方法總結如下:
一、無性繁殖系培養
1.種海帶準備挑選種海帶的方法和程序同傳統采苗方法基本相同,選擇個體寬長、顏色深褐、富有光澤、健康的藻體,并且藻體上孢子囊無附著物、成熟度好。用剪刀剪下約5厘米×5厘米的孢子囊,用消毒棉花蘸煮沸后冷卻海水,將附著在上面的污物拭凈,然后用消毒海水沖洗數次,陰干后,放入10℃低溫消毒海水中,使其放散游孢子。
2.孢子附著游孢子數目達到2~5個/160×*時將海帶取出,用紗布過濾孢子水去除黏液后,將玻片放入。當孢子在玻片附著密度達到10個左右/160×時,取出玻片放入低溫消毒海水中培養。培養條件:水溫10~15℃;光照強度1500~2500米燭;光照時間每日24小時光照。培養液:煮沸冷卻消毒海水,硝酸鈉一氮:百萬分之五,磷酸二氫鉀一磷:百萬分之一。培養液需定時更換,一般每周換水一次。
3.無性繁殖系初培養當配子體生長至可以區分雌雄時,用毛細管將雌、雄細胞單獨取出,分別放入試管內進行培養,培養方法同上。隨著雌雄配子體的快速生長,很快成為球形的絲狀藻球。由于藻球內部細胞不能接受光照,因此影響了生長速度,當藻球生長至直徑1~2毫米,可用消毒玻片將其壓碎,轉移至250毫升三角燒瓶內,不久后每個絲狀細胞段又可重新長成藻球,可再次壓碎使其快速生長。
4.無性繁殖系擴大培養
(1)培養容器:隨著無性繁殖系重量增大,可將其轉移至大的容器內培養。由于玻璃器皿易碎且普遍價格較高,可用礦泉水桶替代,輕便、耐用、實惠且培養效果好。但其透光率在50%左右,需按生長需要光強折算照射光強。
(2)細胞團打碎:擴大培養時,由于工作量較大,不宜繼續采用手工壓碎,可用組織粉碎機將細胞團打碎成細胞段,一般用時10~20秒即可。
(3)培養條件:隨著培養量日漸增大,上層細胞會遮擋住培養光線,影響下層細胞的生長。為加快生長速度,減少生產成本,可向培養液中不間斷充氣,這樣所有細胞團能夠接受充足光照,同時由于細胞團周圍的培養液是流動的,具有較好營養條件,可增加生長速度。隨密度增大,光照強度可適當增加。
(4)日常管理:每周換水1~2次,生長狀態不佳及濃度較大時增加換水次數。換水時提前1小時停止充氣,待細胞團沉降瓶底,吸出上清液,加入新鮮培養液。顯微鏡檢查生長狀態不佳有附著物時,可將細胞團倒入300目網箱,用噴霧器反復沖洗,直到無附著物為止。為避免充氣時培養液污染,每日需定時開紫外線燈管半小時對空氣進行消毒。
二、采苗
1.細胞團分離
(1)一次分離:要達到一定出苗密度,每個育苗簾需雌性無性繁殖系3克,雄性無性繁殖系1.5克。根據育苗量將所需要的雌雄無性繁殖系混合一起,連同少量培養液置于組織粉碎儀內切割,切割時間10~20秒,切割細胞段長度約200微米,即每細胞段有10個左右細胞。
(2)短日照培養:將一次分離后的無性繁殖系重新置于培養瓶中充氣懸浮培養,每日光照時間10小時。
(3)二次分離:第一次分離后10天左右細胞逐漸增大,色素加深,逐漸進入發育狀態。此時可進行第二次分離。用組織粉碎儀再次粉碎切割,然后用500目篩絹過濾出粉碎至適當大小的細胞段用于下一步采苗,一般每細胞段有1~4個細胞。未濾出細胞段繼續粉碎過濾,反復進行,直至全部達到采苗要求。
2.采苗方法
(1)附著基:采用常規生產中使用的棕繩苗簾,經常規處理后,系上1厘米×3厘米大小的500目篩絹,以備育苗前期日常檢查使用。
(2)附著基處理:將準備好的苗簾洗刷、伸直、低溫海水浸泡預冷,單層平面式整齊擺放于已加滿低溫水的池中。
(3)噴灑:將細胞液用低溫海水稀釋至50段/160×以下,用噴霧器均勻噴灑在擺好附著基的池子水面,使其自然均勻沉降于育苗簾的表面。
三、育苗
1.流水細胞段不具備主動附著的能力,容易從附著基上脫落,因此采苗后先采取靜水培養,24小時后微流水(表層流速5厘米/秒以下),72小時之后正常流水(表層流速5~10厘米/秒)。這樣細胞既能夠正常生長發育又能夠避免隨水流大量流失。
2.洗刷幼苗普遍大小4~8列細胞時雖然已出現假根,但尚有部分配子體未轉成孢子體,且部分孢子體處于1~2列細胞,假根不明顯。若此時洗刷,配子體和小孢子體勢必脫落。若孢子體長至1毫米時開始洗刷,由于部分幼苗沒有得到及時清理,影響光照使莖部弱而逐漸脫落,并影響其它幼苗莖部的健壯。所以開始洗刷的最佳時機是孢子體生長至8~16列細胞,幼苗體長0.5毫米左右時,假根明顯且附著牢固。此時開始洗刷既會減少配子體及幼孢子體不必要的脫落,又會促進幼苗的正常健康生長。
孢子體長到8~16列細胞時開始以0.5千克/平方厘米左右的較小壓力洗刷,隨著幼孢子體的生長及附著力的提高逐漸增加洗刷強度和次數。
3.溫度采苗期間保持水溫5~6℃,靜水期間不超過15℃,流水期間7~8℃。
4.光照配子體至8列細胞前,高光3000米燭,平均光1700~1800米燭;8列細胞至0.3毫米,高光3300米燭,平均光1800~1900米燭;0.3~3毫米,高光3600米燭,平均光1900~2000米燭;3~5毫米,高光4000米燭,平均光2100~2200米燭;5~10毫米,高光4500米燭,平均光2200~2400米燭;10毫米以上,高光5000米燭以上。
5.新水量幼苗大小5毫米前,日補充新水1/3,幼苗大小5毫米后,日補充新水1/2。
6.營養鹽幼苗大小5毫米前,硝酸鈉-氮:百萬分之三、磷酸二氫鉀一磷:千萬分之三、檸檬酸鐵一鐵:億分之二;幼苗大小5毫米后,硝酸鈉一氮:百萬分之四、磷酸二氫鉀一磷:千萬分之四。
四、小結與討論
與傳統育苗方式比較,無性繁殖系育苗技術雖經多項技術處理,其采苗效果仍達不到孢子體采苗效果。但這并不意味育苗效果也達不到孢子體育苗效果。海帶育苗生產潛力較大,對采苗質量的要求有一定余地,采苗后相應的技術措施是是至關重要的,可彌補采苗質量不足,在上述一系列技術措施的實施下,兩種育苗方式的育苗效果無明顯差別。
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