中國水產門戶網報道紫菜體細胞培養不同于傳統方法,它必須在溫度適宜下,在一定營養成分的培養液中,經過良好的光照條件才能正常分化發育。
(1)體細胞培養方式:常用的有平面培養與懸浮培養兩種方式:平面培養是將體細胞按一定量投放于培養箱或培養池中進行培養;懸浮培養是用培養瓶或一定嘗試的池子,將一定量的細胞投入,用攪拌器不斷促進水流動,細胞始絡懸浮于水中也可以用通氣管加以通氣,造成水的流動,兩種方式培養,均需要密切注意培養條件和加強管理。
(2)體細胞培養條件:培養的條件有培養液的配制,海水比重的調整、光照、培養的溫度、通氣、營養鹽、換水等。
①培養液配制:培養兩種紫菜的體細胞均是用MES培養液,這是修訂的ES培養液,先配成濃的母液,然后在培養的海水中加入一定量的母液而成。待培養1周后可不加此母液,僅加N9氮肥)和P(磷肥)亦可。
②海水比重:培養開始,先用比重為1.030的海水培養8小時以后,可加入1.020左右海水稀釋到1.027,再過8小時,再稀釋到1.025,最后可稀釋到1.023。以后一直用一般海水培養。這樣逐漸降低比重的目的,是為了避免剛酶解的體細胞因驟然降低比重而引起劇烈滲透壓改變,而使細胞死亡的現象。
③光照條件:剛酶解出的細胞投入培養,開始可以不見光,一天后可見弱光500勒克斯,3天內逐漸加強到1000勒克斯左右。到一周左右可加強到2000-3000勒克斯光時以12:12小時為宜,如利用自然光時,需避免直射或初期培養的強光。
④培養溫度:兩種紫菜體細胞的培養溫度以20±2℃為最適宜,因此培養體細胞唯一需要特殊的條件和海帶育苗室一樣,要有恒溫設備。尤其是在9月初水溫受氣溫影響,一天中變化大,無恒溫控制容易引起培養失敗。如果9月下旬到10月上旬,在江蘇沿海培養條斑紫菜體細胞時,因自然氣溫下降到23℃左右,這時也可進行常溫培養,不需恒溫設備。
⑤營養鹽:除了用MES培養液外,在培養數天后,還需補加氮(N)肥4ppm,磷(P)肥1ppm。
⑥通氣:在固定式或懸浮培養過程中,勇氣是非常重要的,尤其后者水體深,通氣尤為重要,否則細胞極易死亡。但通氣大小亦應適度,氣泡太大易傷害細胞; 氣泡太小細胞又易沉淀。因此在體細胞培養中的通氣標準,也是一項應該研究的內容,目前尚無定論,僅憑經驗辦事。
⑦換水:在培養過程中換水是很重要的,從培養第四天起,每天應換水一部分。首先先使細胞沉淀,抽取上面舊水,然后加入等量海水,如果海水不充足,亦可隔天換水,但不可一次換的太多,新加的海水,必須經過消毒。
⑧管理:體細胞培養,時間雖不長,但也需要加強管理,健全管理規則,切不可粗枝大葉,管理內容除上述①至⑦項外,每天應在上午抽取樣品進行鏡檢,計算細胞成活率和生長發育情況。如發現異常現象,應采取措施以加以搶救或改善。
南方漁網編輯:陳珍
免責聲明:本文在于傳播更多的信息,并不代表本網觀點。本文不保證其內容的準確性、可靠性和有效性,本版文章的原創性以及文中陳述文字和內容并未經過本站證實,對本文以及其中全部或者部分內容、文字的真實性、完整性,數據的準確性本站不作任何保證或承諾,請讀者僅作參考,并請自行核實相關內容。