中國水產(chǎn)門戶網(wǎng)報道廣東省惠州市惠城區(qū)畜牧獸醫(yī)與漁業(yè)局 曾斌斌 王智勇 曾君/文

　　實施水產(chǎn)苗種產(chǎn)地檢疫，從源頭開始預防和控制養(yǎng)殖病害，防止疫病傳播，有利于提高水產(chǎn)苗種質(zhì)量，維護養(yǎng)殖生產(chǎn)者合法權(quán)益、保障水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)健康發(fā)展，提升水產(chǎn)品質(zhì)量安全水平、增強水產(chǎn)品市場競爭力。目前，全國各地正逐步實施水產(chǎn)苗種產(chǎn)地檢疫，作為一項全新的、專業(yè)技術(shù)性強的工作，基層檢疫人員的業(yè)務水平影響著水產(chǎn)苗種產(chǎn)地檢疫工作開展。現(xiàn)就基層水產(chǎn)苗種中魚類產(chǎn)地檢疫技術(shù)問題作簡要探討。

　　一、檢疫工具與材料準備

　　檢疫采樣車輛、車載冰箱、檢疫工具箱、手術(shù)托盤、解剖刀、手術(shù)剪、鑷子、接種環(huán)、顯微鏡、玻片、蓋玻片、培養(yǎng)基、革蘭氏染色液、離心管、20%福爾馬林溶液、無菌水等。

　　二、樣品采集

　　采樣人員到達現(xiàn)場后，樣品的采集嚴格按《水生動物產(chǎn)地檢疫采樣技術(shù)規(guī)范》（SC/T 7103-2008）的要求進行，填寫《現(xiàn)場采樣記錄》，并交被檢疫單位負責人或其委托人簽字確認，樣品采集后及時編號標識。對有臨床癥狀的水生動物采樣數(shù)量為10~20尾，對無臨床癥狀的水生動物采樣，原則上每個采樣批次采150尾。

　　三、現(xiàn)場檢疫

　　1、 外觀觀察
　　采集的樣品首先放到手術(shù)托盤對外觀進行觀察，觀察體形、體色、體態(tài)的變化，體表黏液情況，有無豎鱗、癤瘡、囊腫、充血、出血、潰瘍等癥狀，鰭條、鱗片等損傷情況，眼球有無突出、凹陷或渾濁充血等變化，鰓黏液及顏色變化，肛門是否紅腫、拖便等現(xiàn)象，有無胞囊及其他寄生蟲寄生等情況。

　　2、 解剖觀察
　　樣品經(jīng)外觀觀察，未發(fā)現(xiàn)明顯臨床癥狀，可對其進行解剖觀察。①鰓部觀察：用手術(shù)剪剪去鰓蓋，即可觀察鰓部。②腦部觀察：手持手術(shù)刀，從魚腦部前方位置（眼后緣位置）把魚頭部切開，可見魚腦部。③內(nèi)臟觀察：首先用手術(shù)剪從樣品魚肛門插入，沿腹部剪至胸部位置，然后再從肛門位置沿著魚的體腔逐漸把魚的一邊腹部肌肉剪下，操作時盡量提用手術(shù)剪提起被剪肌肉慢慢剪開，避免剪及內(nèi)臟，解剖觀察要保持魚體濕潤，解剖開后可觀察魚內(nèi)臟，將肝臟、膽囊、脾臟、腸、性腺、鰾、腎臟等內(nèi)臟逐一分開觀察。
　　解剖觀察有無腹水，鰓、腦、肝臟、膽囊、腸、性腺、鰾、腎臟、肌肉等是否正常，有無寄生蟲或胞囊及其他病理變化等。
　　肉眼觀察可以鑒別一些大型寄生蟲，如魚鲺、錨頭鳋、中華鳋、側(cè)殖吸蟲等。

　　3、顯微鏡觀察
　　解剖觀察后，對于肉眼無法鑒別的水生動物疫病種類，可借助顯微鏡進行觀察。用手術(shù)刀或鑷子，在樣品的體表、鰓、腦、肝臟、脾臟、腎臟、腸等易感染疫病部位取少量組織，均勻涂抹于玻片上，加一滴無菌水，蓋上蓋玻片，于顯微鏡上觀察組織是否病變，是否攜帶病原。

　　4、快速試劑盒檢測
　　采用經(jīng)農(nóng)業(yè)部批準的病原快速檢測試劑盒，按照病原快速檢測試劑盒說明書進行快速檢測。

　　四、樣品送檢

　　1、微生物取樣
　　用接種環(huán)在已解剖樣品的易感染疫病部位取樣，接種于培養(yǎng)皿上，采用平板劃線法，在培養(yǎng)皿上來回劃曲線。培養(yǎng)皿上應標明樣品編號，取樣部位等信息，送由實驗室進行生化培養(yǎng)觀察。

　　2、組織取樣
　　用手術(shù)剪剪取樣品的易感染疫病部位組織，裝進離心管中，加入適量20%福爾馬林溶液。離心管上應標明樣品編號，取樣部位等信息，置于4℃冰箱保存，送由實驗室進行分子生物學鑒定。

　　3、活體運輸
　　用容器裝取樣品，加入原池水并加氧，進行活體運輸。

　　五、實驗室檢疫

　　1、傳統(tǒng)鑒定分類法
　　樣品培養(yǎng)皿于生化培養(yǎng)箱中經(jīng)四到五天培養(yǎng)，可從宏觀上觀察菌落形態(tài)、大小、顏色、邊緣、隆起等形態(tài)學特征。
　　用接種環(huán)在培養(yǎng)皿上取樣，制作玻片，經(jīng)革蘭氏染色后細菌與環(huán)境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，而用以分類鑒定。
　　對于仍無法鑒定的種類，可進行生理生化實驗、血清學反應等方法加以鑒定，條件先進的實驗室可采用全自動微生物鑒定系統(tǒng)進行判定。

　　2、分子生物學分類法
　　應用分子生物學方法從遺傳進化角度闡明微生物種群之間的分類學關(guān)系，是微生物分類學研究普遍采用的鑒定方法。對離心管中取樣組織進行DNA/RNA提取，采用COⅠ、16SrRNA/rDNA等分析法，對特定堿基序列進行PCR擴增，產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測后送由專業(yè)生物公司進行基因測序。將所得序列通過Blast程序與GenBank中核酸數(shù)據(jù)進行比對分析，鑒定病原的種或?qū)佟?/div>